Во исполнение постановления СНК СССР от 24 июня 1941 года о создании в прифронтовой полосе из числа добровольцев истребительных батальонов для борьбы со шпионско-диверсионными и десантными группами противника Ростовский горком партии и горисполком приняли решение о формировании отрядов Ростовского народного ополчения. 10 июля начальник Ростовского гарнизона генерал-майор А.А. Гречкин издал приказ о формировании Ростовского стрелкового полка народного ополчения. 10 ноября 1941 года в его состав был включён Ростовский коммунистический полк народного ополчения, состоявший из коммунистов партийных организаций промышленных предприятий, учреждений и учебных заведений города, в основном непризывного возраста, который был сформирован 15 октября. Общая численность полка к моменту его выступления на передовую составляла около 3000 человек.
Боевое крещение Ростовский стрелковый полк народного ополчения принял 20 ноября 1941 года, когда передовые части немецких войск уже вступали в Ростов. В этот день военный совет 56-й армии отдал приказ армейским соединениям, понёсшим большие потери в оборонительных боях, отойти на левый берег Дона и занять там оборону. Прикрывать отход и переправу через Дон советских войск было поручено частям Ростовского гарнизона, основу которого составляли 33-й мотострелковый полк, 230-й конвойный полк НКВД и Ростовский полк народного ополчения. Стойкое сопротивление этих частей обеспечило успешный вывод войск 56-й армии на новые позиции.
При подготовке Ростовской наступательной операции перед частями Ростовского гарнизона была поставлена задача первыми форсировать Дон и закрепиться на правом берегу реки. В ночь с 27 на 28 ноября 2-й батальон полка во главе с комбатом Репиным Г.К. (до войны инженер треста «Кавэлектромонтаж») переправился по тонкому льду Дона в районе цементно-шиферного завода и закрепился в развалинах главного корпуса. Затем реку форсировали остальные подразделения полка. Захватив плацдарм на правом берегу, от цементно-шиферного завода до железнодорожного моста, ополченцы удерживали его до подхода основных сил. В ночь с 28 на 29 ноября ополченцы, вооружённые только ручным огнестрельным оружием и гранатами, атаковали вражеские доты, забросав их связками гранат. В 9 часов утра полк сломал оборону противника и начал развивать наступление вглубь города, освободив Железнодорожный район и центральную часть Ростова. За умелые боевые действия при освобождении города, высокую боеспособность, мужество и отвагу личного состава 29 декабря 1941 года Ростовский полк народного ополчения был зачислен в кадровые части Советской Армии.
В июле 1942 года, когда немецкие войска вновь подступили к Ростову, перед полком была поставлена задача: занять оборону на участке поселок им. Чкалова - аэропорт - станица Аксайская и прикрыть переправы через Дон, по которым отступали части 56-й армии. Полк оставлял город в последний момент и его переправа через Дон проходила под массированным вражеским обстрелом. Из 2000 человек, выступивших из Ростова, к станице Кагальницкой вышло всего около 800 ополченцев.
Осенью 1942 года полк, включённый в состав 339-й стрелковой дивизии, сражался в предгорьях Кавказа, защищал Папайский перевал, прикрывая дорогу Новороссийск - Туапсе. К октябрю в составе полка оставалось всего 140 человек.
За мужество и героизм, проявленные в боях за город Ростов-на-Дону и на Северном Кавказе, 37 бойцов и командиров Ростовского стрелкового полка народного ополчения были награждены орденами и медалями.
